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通过以下方法可使制备柱保持柱效

浏览次数:729发布日期:2022-10-09
   制备柱主要应用在植物化学、药物合成、生物化学等领域的产品的提取及纯化工作中。不同的工作领域中组分的制备和纯化量的差异较大。在生物技术领域中,酶的分离是μg级;在天然产物化学和合成化学领域中,为应对未知成分定性鉴别、结构测定、生物活性测试等要求,需要纯化若干mg级的高纯物;在药品学测试中,需要g级的标准品和对照品;在工业级提纯中,目标产物工业化生产往往需要kg级的分离纯化。
 
  下面咱们来聊一聊如何使用制备柱能保持其柱效:
 
  1、保存时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
 
  2、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使其从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。
 
  3、使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。在后两种情况发生时,小心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出1-2mm高度再把柱内填料整平。然后用适当溶剂湿润的固定相填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善,但是很难恢复到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱(5-30mm),可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效,这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料,只能在pH2-9范围内使用。柱子使用一段时间后,可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶,特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。
 
  4、新的产品在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷,使柱效下降,这时也可补加填料使柱效恢复。每次工作完后,应用洗脱能力强的洗脱液冲洗,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用,应每隔4-5天开机冲洗15分钟。
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