液相色谱C18预柱的规范使用方法分享

更新时间：2025-10-14

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　　在高效液相色谱（HPLC）与超高效液相色谱（UHPLC）分析中，液相色谱C18预柱守护着昂贵的分析柱，拦截样品中的颗粒物、强保留杂质与基质成分，延长主柱寿命，保障分离效果的稳定性。然而，不当使用不仅无法发挥其保护作用，反而可能引入死体积、增加背压，甚至污染系统。掌握科学、规范的使用方法，是让液相色谱C18预柱提升色谱系统整体性能的关键。

　　一、选型匹配

　　固定相匹配：

　　预柱填料必须与分析柱一致（如C18），避免因化学性质差异导致峰形畸变或保留时间漂移。

　　粒径与孔径匹配：

　　预柱粒径（如5μm）应≤分析柱粒径，孔径（如120?）相同，确保流动相与样品兼容。

　　柱规格选择：

　　内径：通常2.1mm或4.6mm，与分析柱匹配；

　　长度：10-20mm，过长增加背压，过短保护不足。

　　二、安装规范

　　位置选择：

　　安装于自动进样器与分析柱之间，确保所有样品先经预柱过滤；

　　若使用柱温箱，预柱应与分析柱同温。

　　连接方式：

　　使用零死体积接头或预柱卡套，避免产生额外死体积，影响峰形；

　　接头拧紧力度适中，防止过紧损坏螺纹或过松导致泄漏。

　　方向确认：

　　预柱有明确流向标记（→），必须与流动相方向一致，不可反接。

　　三、使用前活化

　　目的：

　　去除预柱内保存液（通常为有机相），润湿填料，确保良好润湿性。

　　步骤：

　　以低流速（如0.2mL/min）用强溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗10-15分钟；

　　再用初始流动相平衡15-30分钟，直至压力稳定、基线平稳。

　　四、样品处理

　　样品前处理：

　　所有样品必须经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，去除颗粒物；

　　复杂基质（如血清、组织提取液）建议进行蛋白沉淀、液液萃取或SPE净化，减少强保留杂质。

　　进样量控制：

　　避免超载，通常≤20μL，防止预柱过早饱和。

　　五、运行监控

　　压力监测：

　　定期观察系统背压，若压力异常升高（如上升>15%），提示预柱堵塞。

　　色谱性能：

　　若出现峰形拖尾、保留时间漂移或基线波动，可能预柱污染或失效。

　　更换信号：

　　压力持续升高，经冲洗无效；

　　分离效果明显下降，且排除其他原因。